Überexpression von s-Adenosylhomocysteinhydrolase in Epstein-Barr-Virus-positiven Burkitt-Lymphomzellen

Maret, Claudine; Ritter, Klaus

doi:779

Überexpression von s-Adenosylhomocysteinhydrolase in Epstein-Barr-Virus-positiven Burkitt-Lymphomzellen

Maret, Claudine (Author)

2003

Verantwortlichkeitsangabevorgelegt von Claudine Maret

ImpressumAachen : Publikationsserver der RWTH Aachen University 2003

Umfang88 S., : Ill., graph. Darst.

Aachen, Techn. Hochsch., Diss., 2003

Genehmigende Fakultät
Fak10

Hauptberichter/Gutachter
Ritter, Klaus (Thesis advisor)

Tag der mündlichen Prüfung/Habilitation
2003-12-19

Online
URN: urn:nbn:de:hbz:82-opus-7791
URL: https://publications.rwth-aachen.de/record/59360/files/Maret_Claudine.pdf

Einrichtungen

Medizinische Fakultät (510000-1)

Inhaltliche Beschreibung (Schlagwörter)
Medizin (frei)

Thematische Einordnung (Klassifikation)
DDC: 610

Kurzfassung
Das Ziel der Arbeit war es, die Wirkung der Überexpression von s-Adenosylhomocystein-Hydrolase (AHCY) auf EBV-genomhaltige-Burkitt-Lymphomzellen der Linie Raji zu untersuchen. Dabei stand die morphologische und funktionelle Charakterisierung im Vordergrund der Untersuchungen. Das AHCY-Genprodukt wurde mit Hilfe der RT-PCR amplifiziert und in einem Zweischritt- System in den humanen Expressionsvektor pcDNA3.1-E kloniert. Die erfolgreiche Transformation in E.coli TOP10-Zellen wurde durch Wachstum auf Selektivmedien überprüft und das Insert durch Sequenzierung identifiziert. Die Raji-Zellen wurden durch Elektroporation mit dem Konstrukt transfiziert. Der Erfolg wurde durch die Amplifikation des ß-Lactamase-Gens auf dem Expressionsvektor getestet. Die erfolgreiche Überexpression des AHCY-Gens wurde auf Transkript- und Proteinebene mittels semiquantitativer PCR und Western Blot nachgewiesen. Als Ergebnis der Überexpression wurden folgende Effekte gemessen: - Anstieg des frühen Epstein-Barr-Virus-Antigens „early antigen” (EA), gemessen im Immunfluoreszenztest über die AHCY-Überexpressionszeit hinaus; - Nachweis von BZLF1- und BHRF1- (lytisches Transkript) Genprodukten am 2. Tag nach Transfektion; - Anstieg der DNA-Neusynthese am 2. Tag nach Transfektion; - unverändertes Wachstumsverhaltens im Vergleich zu den Kontrollzellen; - veränderte Expression von Oberflächenmarkern mit signifikantem Anstieg der Antigene der CD19, CD21, CD40 und CD 58; - keine Aktivitätsveränderung der untersuchten Gene gemessen mittels differentieller Genanalyse. Die neu gewonnenen Erkenntnisse bereiten den Weg, die zur Aktivierung des latent persistierenden EBV notwendige Reaktionsfolge aufzuklären. Dies ist ein wichtiger Schritt zur Therapie EBV-assozierter Tumore.

The aim of this work was to examine the impact of s-adenosylhomocystein-hydrolase-overexpression on the EVB-positive Burkitt-lymphoma cell line Raji. The focus of the examination was on the morphological and functional characterisation of this overexpression. The AHCY-genproduct was amplified by RT-PCR and cloned into the human expressionsvector pcDNA3.1-E. The successful transformation into this vector was proven by growth of E.coli-TOP10-cells on anibiotica-containing mediums. The insert was identified by sequencing. Raji-cells were transfected with this construct by electroporation and a semiquantitative PCR and a Western Blot showed the successful overexpression of AHCY on transcript and protein levels. As a result the following effects were measured: - the increase of the early antigen (EA) proven by the immunfluorescenz-test (IFT) - the PCR-products of BZLF1 and BHRF1 the first day after transfection - the increase of DNA-synthesis two days after transfection - unchanged growth in comparison to the control cells - an increased expression of CD 19, CD21, CD40 and CD58 - no change in the activity of the examined genes by differential display These results show a way to elucidate the activation of the latent persisting EBV and its signal paths. This could be a step in finding new therapies against EBV-positive tumors.

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