Gast ::
| 001 | 51766 | ||
| 005 | 20220422215721.0 | ||
| 024 | 7 | _ | |2 Laufende Nummer |a 30341 |
| 024 | 7 | _ | |2 URN |a urn:nbn:de:hbz:82-opus-31953 |
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| 024 | 7 | _ | |2 OPUS |a 3195 |
| 037 | _ | _ | |a RWTH-CONV-114023 |
| 041 | _ | _ | |a English |
| 082 | _ | _ | |a 570 |
| 100 | 1 | _ | |0 P:(DE-82)016205 |a Schwarz, Nicole |b 0 |e Author |
| 245 | _ | _ | |a Requirements for leukocyte transendothelial migration via the transmembrane chemokines CX3CL1 and CXCL16 |c vorgelegt von Nicole Schwarz |h online, print |
| 246 | _ | 3 | |a Funktion der transmembranen Chemokine CX3CL1 und CXCL16 bei der transendothelialen Migration von Leukozyten |y German |
| 260 | _ | _ | |a Aachen |b Publikationsserver der RWTH Aachen University |c 2010 |
| 300 | _ | _ | |a 135 S. : graph. Darst. |
| 336 | 7 | _ | |a Dissertation / PhD Thesis |0 PUB:(DE-HGF)11 |2 PUB:(DE-HGF) |b phd |m phd |
| 336 | 7 | _ | |a Thesis |0 2 |2 EndNote |
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| 336 | 7 | _ | |a DISSERTATION |2 ORCID |
| 502 | _ | _ | |o 2010-03-16 |a Aachen, Techn. Hochsch., Diss., 2010 |g Fak01 |
| 520 | _ | _ | |a The chemokines CX3CL1 and CXCL16 and their receptors CX3CR1 and CXCR6 are described in vascular inflammation and inflammatory cell recruitment. CX3CL1 and CXCL16 are transmembrane surface proteins on endothelial cells inducing firm adhesion of leukocytes via the interaction with their receptors. After shedding from the cell surface by the metalloproteinases ADAM10 and ADAM17, they act as soluble chemoattractants for CX3CR1- and CXCR6-expressing leukocytes, respectively. Here, it was demonstrated that expression of transmembrane CX3CL1 on endothelial cells promotes leukocyte transendothelial migration, and details of the underlying mechanisms using mutated CX3CR1 variants were elucidated. The DRY motif required for Gi-protein-coupling was mutated to DNY, which abolished the intracellular calcium release in response to CX3CL1, but did neither affect CX3CL1 binding nor uptake. Truncation of the C-terminus reduced ligand uptake, but not ligand binding and calcium responses. Both variants effectively mediated firm cell adhesion, but not chemotaxis towards soluble CX3CL1. Furthermore, they failed to induce transmigration, but mediated retention of leukocytes on the CX3CL1-expressing cell layer. Pharmacologic and transcriptional inhibition of ADAM10 led to reduced shedding of transmembrane CX3CL1, which was associated with an almost complete suppression of transmigration in response to transmembrane CX3CL1. These results indicate a multistep process of leukocyte recruitment by transmembrane CX3CL1 involving adhesion, signaling, initiation of transmigration, and finally proteolytic release of the transmigrating leukocytes. In contrast, transmembrane CXCL16 did not promote adhesion of CXCR6-expressing cells, while soluble CXCL16 mediated chemotaxis. CXCR6 bears a DRF instead of the DRY motif. Since this mutation is implicated in the constitutive activity of other receptors, the DRF of CXCR6 was changed into DRY and DNF. Reconstitution of the DRY motif did not affect ligand binding and resulted in a slight decrease in calcium signaling, whereas the mutation into DNF abolished calcium signaling. Both mutated receptors still failed to induce adhesion to CXCL16-expressing cells. Signaling seemed to depend on the arginine residue but not on the tyrosine/phenylalanine residue in DRY/F. These results indicate that CXCL16 predominantly functions as a soluble chemokine. Furthermore, cell recruitment by transmembrane chemokines differs. While CX3CL1 induces signaling-independent adhesion and signaling-dependent transmigration, CXCL16 does not induce adhesion, but chemotaxis. |l eng |
| 520 | 3 | _ | |a Die Chemokine CX3CL1 und CXCL16 und ihre Rezeptoren CX3CR1 und CXCR6 wurden bisher oft im Zusammenhang mit der vaskulären Entzündung und der entzündlichen Zellrekrutierung beschrieben. CX3CL1 und CXCL16 sind transmembrane Oberflächenproteine auf Endothelzellen, die die feste Adhäsion von Leukozyten über die Interaktion mit ihren Rezeptoren vermitteln. Nach ihrem Shedding von der Zelloberfläche durch die Metalloproteasen ADAM10 und ADAM17, wirkt die lösliche Form chemotaktisch auf CX3CR1- bzw. CXCR6-exprimierende Leukozyten. In der vorliegenden Arbeit wurde gezeigt, dass die Expression von transmembranem CX3CL1 auf Endothelzellen transendotheliale Migration von Leukozyten vermittelt und der darunterliegende Mechanismus wurde mit Hilfe von mutierten CX3CR1-Varianten untersucht. Das DRY-Motiv, welches für die Gi-Protein-Kopplung wichtig ist, wurde in DNY verändert. Dies führte zu einer verringerten intrazellulären Kalziumfreisetzung nach Stimulation mit CX3CL1, aber weder die Ligandenbindung noch die Aufnahme des Liganden wurden beeinflusst. Die Trunkierung des C-Terminus hingegen reduzierte die Ligandenaufnahme, aber weder die intrazelluläre Kalziumfreisetzung noch die Ligandenbindung waren beeinträchtigt. Obwohl beide Varianten feste Zelladhäsion vermittelten, konnte eine vermehrte Chemotaxis von Rezeptor-transfizierten Zellen nach Stimulation mit löslichem CX3CL1 gezeigt werden. Darüber hinaus konnten beide CX3CR1-Varianten keine Transmigration induzieren und hielten die Leukozyten sogar auf der Endothelzellschicht zurück. Pharmakologische und transkriptionale Inhibition von ADAM10 führte zu einem verringerten Shedding des transmembranen CX3CL1, was eine fast komplette Reduktion der Transmigration zur Folge hatte. Diese Resultate deuten auf einen mehrstufigen Prozess der Leukozytenrekrutierung durch transmembranes CX3CL1 hin. Dieser Prozess umfasst Adhäsion, Signaltransduktion, Initiierung der Transmigration und schließlich die proteolytische Freisetzung der transmigrierenden Leukozyten. Im Gegensatz dazu vermittelt transmembranes CXCL16 keine Adhäsion von CXCR6-exprimierenden Zellen, obwohl lösliches CXCL16 Chemotaxis induziert. CXCR6 trägt statt des konservierten DRY-Motivs ein DRF-Motiv. Diese Mutation wurde früher im Zusammenhang mit der konstitutiven Aktivität anderer Rezeptoren beschrieben und das DRF-Motiv wurde daher in DRY und DNF geändert. Die Rekonstitution des DRY-Motivs beeinflusste die Ligandenbindung nicht, aber resultierte in einer verringerten Kalziumfreisetzung, wohingegen die Änderung in DNF das Kalziumsignal unterdrückte. Beide mutierten Rezeptoren vermittelten keine Adhäsion an CXCL16-exprimierende Zellen. Die Signaltransduktion scheint somit von dem Arginin-Rest, aber nicht von dem Tyrosin/Phenylalanin-Rest des DRY/F-Motivs abhängig zu sein. Die Resultate zeigen, dass CXCL16 überwiegend als lösliches Chemokin agiert. Darüber hinaus scheint die Zellrekrutierung durch transmembrane Chemokine unterschiedlich zu sein. Während CX3CL1 signal-unabhängige Adhäsion und signal-abhängige Transmigration vermittelt, induziert CXCL16 keine Adhäsion sondern Chemotaxis. |l ger |
| 591 | _ | _ | |a Germany |
| 650 | _ | 7 | |a Leukozyt |2 SWD |
| 650 | _ | 7 | |a Chemotaxis |2 SWD |
| 650 | _ | 7 | |a Chemokine |2 SWD |
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| 700 | 1 | _ | |0 P:(DE-82)009140 |a Ludwig, Andreas |b 1 |e Thesis advisor |
| 856 | 4 | _ | |u https://publications.rwth-aachen.de/record/51766/files/3195.pdf |
| 909 | C | O | |o oai:publications.rwth-aachen.de:51766 |p openaire |p open_access |p urn |p driver |p VDB |p dnbdelivery |
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| Library | Collection | CLSMajor | CLSMinor | Language | Author |
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