h1

000060042 001__ 60042
000060042 005__ 20230512150505.0
000060042 0247_ $$2URN$$aurn:nbn:de:hbz:82-opus-17505
000060042 0247_ $$2HBZ$$aHT014952140
000060042 0247_ $$2OPUS$$a1750
000060042 0247_ $$2Laufende Nummer$$a27463
000060042 037__ $$aRWTH-CONV-121772
000060042 041__ $$aGerman
000060042 082__ $$a570
000060042 1001_ $$0P:(DE-82)061516$$aKnöbel, Sebastian Mathias$$b0$$eAuthor
000060042 245__ $$aLeber-Fibrose: Erstellung eines Modells zur Analyse lebertoxischer Substanzen und Analyse der ltbp1-abhängigen Aktivierung hepatischer Sternzellen$$cvorgelegt von Sebastian Mathias Knöbel$$honline, print
000060042 246_3 $$aLiver fibrosis : generation of a model for the analysis of liver toxic substances and analysis of the ltbp1-dependent activation of hepatic stellate cells$$yEnglish
000060042 260__ $$aAachen$$bPublikationsserver der RWTH Aachen University$$c2006
000060042 300__ $$aV, 132 S. : Ill., graph. Darst.
000060042 3367_ $$0PUB:(DE-HGF)11$$2PUB:(DE-HGF)$$aDissertation / PhD Thesis$$bphd$$mphd
000060042 3367_ $$02$$2EndNote$$aThesis
000060042 3367_ $$2DRIVER$$adoctoralThesis
000060042 3367_ $$2BibTeX$$aPHDTHESIS
000060042 3367_ $$2DataCite$$aOutput Types/Dissertation
000060042 3367_ $$2ORCID$$aDISSERTATION
000060042 502__ $$aAachen, Techn. Hochsch., Diss., 2006$$gFak01$$o2006-11-30
000060042 5203_ $$aDie Leber ist das zentrale Organ des Stoffwechsels und gleichzeitig die größte Drüse des Säugetierorganismus. Ein Ausfall der Leberfunktion nach chronischer Schädigung, beispielsweise durch Infektionen oder toxische Substanzen, hat allerdings drastische Konsequenzen für den Organismus. Daher fällt der Erforschung der Ursachen und Pathogenese von Lebererkrankungen eine wichtige Rolle zu. Im Rahmen dieser Arbeit wurden zwei Projekte aus dem Themenkomplex Leber-Fibrose bearbeitet. Im ersten Teil der Arbeit wurde versucht, einen transgenen Oberflächenmarker (EGFP) hepatozytenspezifisch zu exprimieren, um damit aus in-vitro-differenzierten ES-Zellen spezifisch hepatische Vorläuferzellen zu isolieren und diese für in-vitro-Toxizitäts-Assays einsetzen zu können. Nach der Validierung der angestrebten Isolierungsmethode (MACS), wurde ein Reporterkonstrukt zur albumin-Promotor-getriebenen Oberflächen- und Selektionsmarker-Expression kloniert und hinsichtlich der Expressionsspezifität in vitro und in vivo untersucht. In der murinen Hepatomzelllinie HEPA-1-6 konnte die Funktionalität des Konstruktes nachgewiesen werden. In verschiedenen ES- Zellklonen führte das Konstrukt jedoch zu unspezifischer Basalexpression und lieferte auch nach Differenzierung der ES-Zellen zu hepatozytenartigen Zellen keine nennenswerten Mengen an EGFP-Protein. In einem durch Oozyteninjektion generierten Mausmodell führte das Konstrukt ebenfalls zur Expression nur geringster Mengen an EGFP in der Leber. Ein parallel verfolgter knock-in-Ansatz zur gerichteten Integration des Selektionsmarkers in das ES-Zell-Genom unter Kontrolle des natürlichen albumin-Locus lieferte keine positiven Klone. Im zweiten Teil der Arbeit wurde der Einfluss des latent transforming growth factor beta binding protein 1 (LTBP1) auf die Aktivierung bzw. Transdifferenzierung hepatischer Sternzellen (HSC) in vitro und in vivo untersucht, einem für die Pathogenese der Leber-Fibrose entscheidendem Prozess. Als Grundlage diente eine ltbp1-defiziente Maus, bei der beide bekannten Protein-Isoformen LTBP1-L und LTBP1-S fehlen. Die nähere Charakterisierung führte zur Identifikation einer neuen Spleissvariante der ltbp1-mRNA, die in analoger Form bei Mensch und Ratte vorkommt. Durch Microarray-Analysen konnte eine verringerte Tendenz zur in-vitro-Transdifferenzierung ltbp1-defizienter HSC nachgewiesen werden. Zusätzlich wurden - neben bekannten Markergenen für aktivierte HSC – weitere, noch nicht beschriebene Markergene identifiziert. Anschließende in-vivo-Studien in einem experimentellen Modell zur Induktion der Leber-Fibrose bestätigten die aus der in-vitro-Studie abgeleitete Hypothese einer verminderten Transdifferenzierungsneigung von ltpb1-defizienten HSC in fibrosierenden Lebererkrankungen, die sich in einer verminderten Kollagendeponierung durch HSC im Leberparenchym der knock-out-Tiere äußerte. Die Studie gewährt somit Einblick in die Rolle des LTBP1 während der Pathogenese der Leber-Fibrose und betont seine klinische Relevanz, die durch weitere Analysen zu bestätigen sein wird.$$lger
000060042 520__ $$aThe liver is the central organ of metabolism and at the same time constitutes the biggest gland of the mammalian organism. Breakdown of liver function after chronic damage caused by viral infection or toxic substances implicates severe consequences for the organism. Research on the causes and the pathogenesis of liver diseases therefore is of major importance. This work adresses two questions in relation to liver fibrosis. The first part of this work deals with the expression of EGFP as a transgenic hepatocyte specific surface marker, by means of which hepatic precursors can be isolated from in vitro differentiated murine embryonic stem cells to generate functional cells for toxicological screenings. After validation of the isolation method (MACS), a reporter construct with an albumin promotor driven expression of the surface-/selection-marker was cloned and the expression specificity was analysed in vitro and in vivo. The functional expression of the transgene and its correct subcellular localization was confirmed using the hepatoma cell line HEPA-1-6. However, transfected ES cells showed basal, albumin independent expression of the transgene and even after in vitro differentiation into hepatocyte like cells did not express sufficient amounts of EGFP protein. Analysis of a transgenic mouse model generated by oocyte injection with the same reporter construct revealed that even under in vivo conditions only marginal amounts of EGFP were produced in the liver. Using a targeting strategy which aimed to knock in the EGFP-selection marker into the mouse albumin locus did not lead to the identification of positive ES cell clones. In the second part of this work, the influence of the latent transforming growth factor beta binding protein 1 (LTBP1) on the „activation“ of hepatic stellate cells (HSC) was analysed. Following „activation“ HSC transdifferentiate towards a myofibroblastic phenotype and constitute the most important fibrogenic cell type during the pathogenesis of liver fibrosis. Using a ltbp1-deficient mouse model in which both known protein isoforms LTBP1-L and LTBP1-S are missing, revealed a new ltbp1 splice variant of which analogous isoforms also exist in rats and humans. Microarray analysis was used to identify known and so far unknown marker genes for activated HSC and more importantly demonstrated that ltbp1-deficient HSC have a reduced tendency to transdifferentiate in vitro. This observation was independently confirmed in vivo using an experimental model for the induction of liver fibrosis (ligation of the common bile duct). After 4 weeks of bile duct obstruction, ltbp1-/- mice showed markedly reduced signs of liver fibrosis, i.e. less Collagen I deposition by HSC in the affected liver parenchyma. The study therefore provides insight into the role of LTBP1 during the pathogenesis of liver fibrosis and points out the clinical relevance of LTBP1, which needs to be confirmed by subsequent analysis.$$leng
000060042 591__ $$aGermany
000060042 653_7 $$aBiowissenschaften, Biologie
000060042 653_7 $$2ger$$aMACS
000060042 653_7 $$2ger$$ain vitro Differenzierung
000060042 653_7 $$2ger$$ahepatische Sternzelle
000060042 653_7 $$2ger$$aHepatozyt
000060042 653_7 $$2ger$$altbp1
000060042 653_7 $$2eng$$aembryonic stem cell
000060042 653_7 $$2eng$$ain vitro differentiation
000060042 653_7 $$2eng$$ahepatocyte
000060042 653_7 $$2eng$$ahepatic stellate cell
000060042 653_7 $$2eng$$aliver fibrosis
000060042 650_7 $$2SWD$$aLeber
000060042 650_7 $$2SWD$$aLeberkrankheit
000060042 650_7 $$2SWD$$aLeberperfusion
000060042 650_7 $$2SWD$$aLeberepithelzelle
000060042 650_7 $$2SWD$$aDifferenzierung
000060042 650_7 $$2SWD$$aEmbryonale Stammzelle
000060042 650_7 $$2SWD$$aIto-Zelle
000060042 650_7 $$2SWD$$aFibrose
000060042 650_7 $$2SWD$$aToxizität
000060042 650_7 $$2SWD$$aKollagen
000060042 650_7 $$2SWD$$aFACS
000060042 650_7 $$2SWD$$aFluoreszenzaktivierter Zellsortierer
000060042 650_7 $$2SWD$$aZellfraktionierung
000060042 650_7 $$2SWD$$aGrün fluoreszierendes Protein
000060042 7001_ $$0P:(DE-82)IDM05726$$aWeiskirchen, Ralf$$b1$$eThesis advisor$$urwth
000060042 8564_ $$uhttps://publications.rwth-aachen.de/record/60042/files/Knoebel_Sebastian.pdf
000060042 8564_ $$uhttps://publications.rwth-aachen.de/record/60042/files/60042_kardex.pdf$$yInternal catalog entry
000060042 909CO $$ooai:publications.rwth-aachen.de:60042$$pdnbdelivery$$pVDB$$pdriver$$purn$$popen_access$$popenaire
000060042 915__ $$0StatID:(DE-HGF)0510$$2StatID$$aOpenAccess
000060042 9201_ $$0I:(DE-82)526000-2_20140620$$k526000-2$$lLehrstuhl für Klinische Chemie und Pathobiochemie$$x0
000060042 961__ $$c2014-12-04$$x2007-01-10$$z2012-02-20
000060042 970__ $$aHT014952140
000060042 980__ $$aphd
000060042 980__ $$aI:(DE-82)526000-2_20140620
000060042 980__ $$aVDB
000060042 980__ $$aUNRESTRICTED
000060042 980__ $$aConvertedRecord
000060042 9801_ $$aFullTexts
000060042 980__ $$aFullTexts