Analyse der Annexin-1-Expression und Identifikation neuer Glukokortikoid-stimulierbarer Gene durch Differential-Display-RT-PCR-Methodik in humanen Makrophagenkulturen

Zsolnai, Andreas; Zwadlo-Klarwasser, Gabriele-Claudia

doi:HT013113598

Analyse der Annexin-1-Expression und Identifikation neuer Glukokortikoid-stimulierbarer Gene durch Differential-Display-RT-PCR-Methodik in humanen Makrophagenkulturen

Zsolnai, Andreas (Author)

2001

Verantwortlichkeitsangabevorgelegt von Andreas Zsolnai

ImpressumAachen : Publikationsserver der RWTH Aachen University 2001

Umfang95 S. : Ill.

Aachen, Techn. Hochsch., Diss., 2001

Genehmigende Fakultät
Fak10

Hauptberichter/Gutachter
Zwadlo-Klarwasser, Gabriele-Claudia (Thesis advisor)

Tag der mündlichen Prüfung/Habilitation
2001-03-05

Online
URN: urn:nbn:de:hbz:82-opus-1415
URL: https://publications.rwth-aachen.de/record/60092/files/Zsolnai_Andreas.pdf

Einrichtungen

Medizinische Fakultät (510000-1)

Inhaltliche Beschreibung (Schlagwörter)
Medizin (frei)

Thematische Einordnung (Klassifikation)
DDC: 610

Kurzfassung
Der molekulare Wirkungsmechanismus der entzündungshemmenden Eigenschaften von Glukokortikoiden ist seit vielen Jahren Gegenstand intensiver Forschung. Bestimmte Vorgänge führen zu Veränderungen der Transkription verschiedener Gene, unter anderem solche, die für Proteine kodieren, welche einen Teil der entzündungshemmenden Wirkungen der Glukokortikoide vermitteln sollen, wie das Annexin-1. Im ersten Teil der vorliegenden Arbeit wurde daher der Einfluß des Glukokortikoids Prednyliden auf die Annexin-1-Expression in humanen Monozyten und deren Kulturen (Makrophagen) untersucht. Als Referenz für die Glukokortikoidwirkung diente auf mRNA-Ebene die Expression von Methallothionein-2 und auf Proteinebene die des Makrophagen spezifischen RM 3/1 Antigens. Im zweiten Teil der Arbeit wurde mit der Differential-Display-RT-PCR-Methodik nach neuen Genen gesucht, die in Monozyten/Makrophagen durch Glukokortikoide induziert oder stimuliert werden. Unsere Ergebnisse zeigen, daß die Annexin-1-Produktion in humanen Monozyten und Monozytenkulturen weder auf Genebene noch auf Proteinebene durch Glukokortikoide reguliert wird. Dadurch wird seine postulierte Eigenschaft als second messenger Molekül für entzündungshemmende Wirkungen von Glukokortikoiden zumindest bei Makrophagen in Frage gestellt. Sie lassen eher darauf schließen, daß Annexin-1 in diesen Zellen ein konstitutives, zytosolisches Protein darstellt. Die Ergebnisse zeigen ferner, daß durch Glukokortikoide in Makrophagen eine Reihe von Genen angeschaltet oder hochreguliert werden, wobei mit Hilfe der Differential-Display-RT-PCR-Methodik neben bekannten glukokortikoid-regulierten Genen wie dem Methallothionein-2 oder dem RM 3/1-CD163-Scavenger Rezeptor auch neue Gene wie die Katalase und bisher unbekannte entdeckt werden konnten.

The molecular mode of action of the antiphlogistic properties of glucocorticoids has been subject of intense investigation for many years. Certain processes lead to changes in the transcription of different genes, inter alia of those genes which encode for proteins and which are to transmit a part of the antiphlogistic effects of the glucocorticoids, as is the case with Annexin-1. In the first part of the present study we examined the influence of the glucocorticoid prednylidene on the Annexin-1 expression in human monocytes and their cultures (macrophagocytes). The expression of metallothionin-2 served as reference for the effects of the glucocorticoids on the mRNA-level whereas we used the RM 3/1- antigen which is specific of the macrophage as reference on the protein level. In the second part of the study we searched for new genes which are induced or stimulated by glucocorticoids in monocytes/macrophages, using the differential-display-RT-PCR-method. The results show that neither on the gene level nor on the protein level the production of Annexin 1 in human monocytes and monocytic cultures is regulated by glucocorticoids. These results call into question its assumed property as second messenger molecule for the antiphlogistic effects of glucocorticoids, at least in the case of macrophages. These findings rather suggest that Annexin-1 constitutes a constitutive cytosol protein in these cells. The findings also show that a considerable number of genes in macrophages is triggered or highly regulated by glucocorticoids. With the help of the differential-display-RT-PCR-method we could not only discover already known glucocorticoid-regulated genes as metallothionin-2 or the RM 3/1-CD163 scavenger receptor but also new genes such as the catalase or other hitherto unknown genes.

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