In-vitro- und In-situ-Analyse des Tumorsuppressorgens hp19 ARF in malignen Melanomen

Dobrowolski, Rafael; Boßerhoff, Anja-Katrin

doi:25719

In-vitro- und In-situ-Analyse des Tumorsuppressorgens hp19 ARF in malignen Melanomen

Dobrowolski, Rafael

2004

Verantwortlichkeitsangabevorgelegt von Rafael Dobrowolski

ImpressumAachen : Publikationsserver der RWTH Aachen University 2004

UmfangIV, 123 S. : Ill., graph. Darst.

Aachen, Techn. Hochsch., Diss., 2004

Genehmigende Fakultät
Fak10

Hauptberichter/Gutachter
Boßerhoff, Anja-Katrin (Thesis advisor)

Tag der mündlichen Prüfung/Habilitation
2004-01-19

Online
URN: urn:nbn:de:hbz:82-opus-7552
URL: https://publications.rwth-aachen.de/record/61988/files/Dobrowolski_Rafael.pdf

Einrichtungen

Medizinische Fakultät (510000-1)

Inhaltliche Beschreibung (Schlagwörter)
Medizin (frei) ; melanom (frei) ; hp19arf (frei) ; p14arf (frei) ; p16 (frei)

Thematische Einordnung (Klassifikation)
DDC: 610

Kurzfassung
Eine fehlende Expression von hp19ARF (= p14ARF) oder seine funktionelle Inaktivierung ist sowohl in humanen als auch in tierischen Karzinomen beobachtet worden. Obwohl bis heute nur wenige Veränderungen der hp19ARF-Expression in einigen Krebsarten entdeckt worden sind, scheinen diese Anomalien eine wichtige Rolle nicht nur in der bereits bekannten Entwicklung von Mesotheliomen sondern auch bei der Entstehung von anderen menschlichen Karzinomarten zu spielen. Um die Expression des hp19ARF-Gens und des hp19ARF-Proteins in Melanomen zu prüfen, wurden an acht humanen Melanom-Zelllinien und primären humanen Melanozyten RT-PCR-Versuche mit nachfolgender Sequenzenanalyse und Immunoblott-Untersuchungen durchgeführt. Bei allen analysierten Melanom-Zelllinien konnte eine regelrechte Expression der hp19ARF-mRNA ebenso wie des Proteins nachgewiesen werden. Die hp19ARF-Expression in-situ wurde mit immunhistochemischen Methoden an 32 Gewebeproben von benignen melanozytären Naevi (n=14), Melanomen (n=12) und Melanom-Metastasen (n=6) untersucht. Im Gegensatz zu den Ergebnissen der in-vitro-Experimente mit den Zelllinien, enthüllten die immunhistochemischen Versuche eine Korrelation zwischen der Progression der Melanome und der fehlenden hp19ARF-Proteinexpression. Positive hp19ARF-Proteinnachweise konnten in 11 von 14 der benignen melanozytären Naevi, in 3 von 12 der Melanome und in 0 von 6 der Melanom-Metastasen beobachtet werden. Zusammenfassend konnten wir eine signifikante umgekehrte Beziehung zwischen der hp19ARF- Expression und der Melanomprogression zeigen, bei der die positiven Proteinnachweise vom melanozytären Naevus über das eigentliche Melanom bis zu den Melanom-Metastasen kontinuierlich abnahmen. Diese Ergebnisse suggerieren, dass eine hp19ARF-Inaktivierung durchaus eine wichtige Rolle bei der Entwicklung maligner Melanome spielen kann.

Lack of hp19ARF (=p14ARF) expression or its functional inactivation has been observed in human and murine carcinomas. Although very few mutations of hp19ARF have been detected in some cancer types, changes in expression seem to play an important role in the development of other human cancers such as mesotheliomas. To examine the hp19ARF gene and expression of hp19ARF protein in melanomas, we screened eight human melanoma cell lines and primary human melanocytes by RT-PCR, sequencing and immunoblotting. All melanoma cell lines analyzed expressed wild-type hp19ARF mRNA as well as protein. Hp19ARF expression was investigated by immunohistochemical staining of 32 tissue samples of benign melanocytic nevi (n=14), melanomas (n=12) and melanoma metastases (n=6). In contrast to the results obtained from cell lines in vitro the immunohistochemical stainings revealed a correlation between the progression of melanoma and the lack of the hp19ARF protein expression. Positive hp19ARF protein staining was observed in 11 of 14 benign nevi, in 3 of 12 melanomas and in 0 of 6 melanoma metastases. In summary, we demonstrated a significant inverse correlation between hp19ARF protein expression and progression of melanocytic tumors since the amount of hp19ARF protein staining decreased from benign melanocytic nevi to metastatic melanoma in situ. These results suggest that hp19ARF inactivation is important in the development of melanomas.

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